常見(jiàn)問(wèn)題與解答
一般來(lái)說(shuō)，相同序列和修飾、相同數(shù)量的多肽會(huì)因?yàn)槠浼兌鹊牟煌鴥r(jià)格各異，純度越高，單位質(zhì)量的多肽價(jià)格也越高。肽谷生物可以提供粗品、脫鹽，70%到99%不同純度級(jí)別的多肽供客戶按需選擇使用。 各種多肽純度及應(yīng)用范圍如下：
大規(guī)模功能性篩選
粗品多肽
肽微陣列
作為制備抗體的抗原
層析法
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)抗血清滴度
>70%和>75%的多肽
免疫印跡法（非定量）
酶底物肽（非定量）
封閉肽（非定量
親和純化
磷酸化檢測(cè)
蛋白電泳的應(yīng)用和免疫細(xì)胞化學(xué)
>80%，>85%和>90%的多肽
標(biāo)準(zhǔn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和RIA（定量）
受體配體相互作用（定量）
體內(nèi)、體外 生物學(xué)測(cè)定
酶的研究和阻斷實(shí)驗(yàn)（定量）
NMR研究
質(zhì)譜分析
其他定量檢測(cè)
>95%的多肽
SAR研究
臨床試驗(yàn)
APIs(藥物活性成分)
工業(yè)品
X-ray晶體研究
其他敏感的實(shí)驗(yàn)：酶與底物、受體與配體相互作
用、阻斷和競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)
>98%的多肽
所有的凍干多肽產(chǎn)品可以在常溫下避光運(yùn)輸，并可以在室溫條件下保存幾天或者少于一個(gè)星期，多肽性狀是穩(wěn)定的。所有的凍干多肽產(chǎn)品，都必須保存在干燥低溫的條件下，以-20℃的低溫為佳，若有條件最好保存在-80℃以下，在這樣的條件下大多數(shù)多肽可存放1-2年。
當(dāng)需要使用多肽產(chǎn)品時(shí)，應(yīng)在開(kāi)蓋之前將多肽產(chǎn)品升至室溫；對(duì)保存于-20℃的產(chǎn)品，該過(guò)程需要1h或更長(zhǎng)，因包裝大小而異。否則，當(dāng)打開(kāi)瓶蓋時(shí)，水氣進(jìn)入會(huì)導(dǎo)致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開(kāi)，應(yīng)迅速稱量完畢，并立即密閉以免潮解，親水肽尤其應(yīng)注意。
對(duì)序列中含有Cys、Met、Try的易氧化多肽和含有Gln、Asn、Asp的易降解多肽，應(yīng)避免反復(fù)融凍，以免多肽被氧化和降解，因此建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少，用后棄去，不要保存。
對(duì)于暫時(shí)不用的多肽，不要以溶液的形式保存（即使在-80°C的條件下）。
多肽的溶解性很大程度上取決于多肽的極性。酸性的蛋白溶解于堿性溶液， 而堿性蛋白可溶解于酸性溶液，含有大量不帶電荷的極性氨基酸殘基或疏水性氨基酸的疏水性多肽和中性多肽可先溶解于少量有機(jī)溶劑中，如DMSO、DMF、醋酸、乙腈、甲醇、丙醇或異丙醇，然后加蒸餾水稀釋。含有甲硫氨酸或半胱氨酸的多肽不能用DMSO溶解，因?yàn)镈MSO可能造成側(cè)鏈氧化。
多肽溶解測(cè)試： 在多肽溶解之前先取小部分進(jìn)行多肽溶解測(cè)試，您需要測(cè)試幾種不同的溶劑，直到找到最適當(dāng)?shù)囊环N。超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。（注意: 超聲處理會(huì)引起溶液發(fā)熱和多肽降解。）
1，
將每個(gè)酸性氨基酸賦值為-1，包括天冬氨酸（D）、谷氨酸（E）、以及羧基末端-COOH。 每個(gè)堿性氨基酸賦值為+1，包括精氨酸（R）、賴氨酸（K）、組氨酸（H）以及氨基末端-NH2。然后計(jì)算整個(gè)多肽的電荷數(shù)。2，
如果整段肽所帶電荷是陽(yáng)性的，說(shuō)明該肽是堿性的?？上葒L試用蒸餾水來(lái)溶解；如果不溶于水，接著嘗試用少量10%-25%醋酸溶解，如果仍然失敗的話，添加一些TFA（10-50微升）來(lái)增溶，然后用水稀釋至理想濃度。3，
如果整段肽所帶電荷是陰性的，說(shuō)明該肽是酸性的。酸性的多肽可以嘗試用PBS（PH 7.4）來(lái)溶解， 如果不溶的話，添加少量的堿性溶劑，如0.1 M的碳酸氫銨，然后加水稀釋至理想濃度。含有游離半胱氨酸的多肽應(yīng)溶于脫氣的酸性緩沖液中，因?yàn)楫?dāng)PH值大于7時(shí)，巰基會(huì)被迅速氧化成二硫化物。4，
如果整段肽電荷是零，說(shuō)明肽是中性的。中性肽通常溶于有機(jī)溶劑。首先，嘗試添加少量乙腈、甲醇或異丙醇。對(duì)于高度疏水的多肽，可使用少量的二甲基亞砜溶解，然后用水稀釋至理想濃度。對(duì)于含有自由半胱氨酸的肽，需使用DMF而不是DMSO。對(duì)于有聚集傾向的肽，可添加6M鹽酸胍或8M尿素，然后進(jìn)行必要的稀釋。為了防止或盡量減少多肽降解，請(qǐng)將多肽以凍干粉形式保存在-20°C，-80°C更佳。如果需要保存溶液肽，最好分成小樣存放，以避免反復(fù)凍融。一份樣品融凍后未用完，應(yīng)扔掉。細(xì)菌降解有時(shí)會(huì)成為溶液肽的麻煩，所以請(qǐng)將肽溶于無(wú)菌水或肽溶液過(guò)濾除菌。
如何選擇合適的熒光標(biāo)記基團(tuán)取決于您的實(shí)驗(yàn)需求。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究基本分為體內(nèi)研究和體外研究?jī)纱箢悺?/p>
對(duì)于體內(nèi)研究，一般選擇發(fā)射波長(zhǎng)在650-900nm的熒光基團(tuán)，例如：ICG、Cy5.5和 Nile Blue。這是因?yàn)檫@類基團(tuán)所發(fā)出的熒光具有較好的組織穿透能力，受背景干擾較小(水、血紅蛋白和脫氧血紅蛋白一般都會(huì)產(chǎn)生背景干擾吸收，其區(qū)域在560nm左右)。
對(duì)于體外研究，發(fā)射波長(zhǎng)在400到600nm的熒光基團(tuán)最為常用，例如：AMC、FITC和TAMRA。
熒光標(biāo)記的多肽在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用是很廣泛的。例如：用Cy5.5標(biāo)記的目標(biāo)多肽研究對(duì) c-Met受體的綁定作用。有人設(shè)計(jì)含有KSLSRHDHIHHH序列的cMBP，其C端為GGGSC， C端Cys用 Cy5.5-Maleimide標(biāo)記其巰基側(cè)鏈。研究結(jié)果表明：上述Cy5.5-cMBP多肽與U87MG腫瘤細(xì)胞共孵24小時(shí)后，具有較高的癌細(xì)胞攝取值，其響應(yīng)濃度在納摩爾級(jí)別。
脫酰胺反應(yīng)：在脫酰反應(yīng)中，Asn/Gln 殘基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脫酰胺反應(yīng)的進(jìn)行。 在Asn-Gly-結(jié)構(gòu)中的酰胺基團(tuán)更易水解，位于分子表面的酰胺基團(tuán)也比分子內(nèi)部的酰胺基團(tuán)易水解。
氧化多肽溶液易氧化的主要原因有兩種，一是溶液中有過(guò)氧化物的污染，二是多肽的自發(fā)氧化。在所有的氨基酸殘基中，Met、Cys和His、Trp、Tyr等最易氧化。氧分壓、溫度和緩沖溶液對(duì)氧化也都有影響。
水解：多肽中的肽鍵易水解斷裂。由Asp參與形成的肽鍵比其它肽鍵更易斷裂，尤其是Asp-Pro和Asp-Gly 肽鍵。
形成錯(cuò)誤的二硫鍵：二硫鍵之間或二硫鍵與巰基之間發(fā)生交換可形成錯(cuò)誤的二硫鍵，導(dǎo)致三級(jí)結(jié)構(gòu)改變和活性喪失。
消旋：除Gly外，所有氨基酸殘基的α碳原子都是手性的，易在堿催化下發(fā)生消旋反應(yīng)。其中Asp殘基最易發(fā)生消旋反應(yīng)。
β-消除：β-消除是指氨基酸殘基中β碳原子上基團(tuán)的消除。Cys、Ser、Thr、Phe、Tyr等殘基都可通過(guò)β-消除降解。在堿性PH下易發(fā)生β-消除，溫度和金屬離子對(duì)其也有影響。
變性、吸附、聚集或沉淀變性一般都與三級(jí)結(jié)構(gòu)以及二級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞有關(guān)。在變性狀態(tài)，多肽往往更易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，活性難以恢復(fù)。在多肽變性過(guò)程中，首先形成中間體。通常中間體的溶解度低，易于聚集，形成聚集體，進(jìn)而形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。
定點(diǎn)突變: 通過(guò)基因工程手段替換引起多肽不穩(wěn)定的殘基或引入能增加多肽穩(wěn)定性的殘基， 可提高多肽的穩(wěn)定性。
化學(xué)修飾: 多肽的化學(xué)修飾方法很多，研究最多的是PEG修飾。PEG是一種水溶性高分子化合 物，在體內(nèi)可降解，無(wú)毒。PEG與多肽結(jié)合后能改善多肽的溶解性，可以進(jìn)行生物相容性調(diào)節(jié)，提高熱穩(wěn)定性，抵抗蛋白酶的降解，降低抗原性，延長(zhǎng)體內(nèi)半衰期。 選擇合適的修飾方法和控制修飾程度可體質(zhì)或提高原生物活性。
添加劑: 通過(guò)加入添加劑，如糖類、多元醇、明膠、氨基酸和某些鹽類，可以提高多肽的穩(wěn)定性。糖和多元醇在低濃度下迫使更多的水分子圍繞在蛋白質(zhì)周?chē)?，因而提高了多肽的穩(wěn)定性。在凍干過(guò)程中，上述物質(zhì)還可以取代水而與多肽形成氫鍵來(lái)穩(wěn)定多肽的天然構(gòu)象 ，而且還可以提高凍干制品的玻璃化溫度。此外表面活性劑如SDS、Tween、Pluronic能防止多肽表面吸附、聚集和沉淀。
凍干: 多肽發(fā)生的一系列化學(xué)反應(yīng)如脫酰胺、β-消除、水解等都需要水參與，水還可以作為其它反應(yīng)劑的流動(dòng)相。另外，水含量降低可使多肽的變性溫度升高。因此，凍干可提高多肽的穩(wěn)定性。
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