難溶肽純化技術(shù)
在我們多肽生產(chǎn)純化過程中，經(jīng)常會(huì)遇到難溶的序列，這導(dǎo)致了眾多多肽公司多肽成產(chǎn)過程中收率低，難純化，成品純度不合格甚至多肽生產(chǎn)失敗等后果，這種難溶性與多肽自身的氨基酸組成及序列有密切關(guān)系，我們?cè)诙嚯念I(lǐng)域內(nèi)長期深入的研究，讓我們積累了大量的寶貴經(jīng)驗(yàn)，保證我對(duì)于難溶肽的溶解純化保持很高的成功率和產(chǎn)品質(zhì)量。
我們對(duì)于難溶肽的溶解總結(jié)出以下幾點(diǎn)：
通常整體顯酸性的多肽溶解困難時(shí)可以加入適量的堿性溶液，而顯堿性的多肽溶解困難時(shí)可以加入適量的酸性溶液;。
序列中含有大量疏水性氨基酸或中性氨基酸時(shí)，難于直接溶于水，通常需要先加入少量有機(jī)溶劑，溶解完全后用蒸餾水大量稀釋，常用的有機(jī)溶劑有乙腈，DMSO，DMF，丙醇，異丙醇等;
當(dāng)肽鏈中含有Met或者Cys時(shí)，不能用DMSO溶解，因?yàn)镈MSO有氧化性，這很可能會(huì)導(dǎo)致肽鏈中含有的S被氧化;
專肽專柱：我們?cè)陂_發(fā)Amyloid系列產(chǎn)品的過程中，發(fā)現(xiàn)用DMOS溶解的產(chǎn)品純化后使用的純化柱基本就不能用于其他產(chǎn)品的純化，為了保證Amyloid產(chǎn)品的穩(wěn)定，我們對(duì)于Amyloid等類似產(chǎn)品都配用了專門的純化柱。
在不影響您實(shí)驗(yàn)需求的情況下，也可以針對(duì)肽鏈的物理性質(zhì)，化學(xué)性質(zhì)和分子結(jié)構(gòu)，對(duì)多肽進(jìn)行修飾改變，增加其溶解性，以下是我們的建議：
修飾肽鏈中C端和N端：對(duì)于酸性肽，我們推薦C端乙酰化修飾;對(duì)于堿性肽，我們推薦N端氨基化修飾;
修改肽鏈中的氨基酸序列：某些序列存在大量的連續(xù)的疏水性氨基酸，例如W, F, V,I, L, M, Y ,這些疏水氨基酸在序列中大量或者連續(xù)重復(fù)出現(xiàn)時(shí)，整條肽鏈通常是難溶的，為了增強(qiáng)肽的極性和親水性，我們建議客戶在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，延長序列，或者通過減少疏水性氨基酸的個(gè)數(shù)來增加溶解性。
替換序列中疏水性氨基酸的殘基：在不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，用可溶性的氨基酸替代序列中的疏水性氨基酸可以達(dá)到增加溶解度的效果。我們通常用Gly, Ala來替換疏水性氨基酸，一般都會(huì)取得比較好的溶解效果，這也是一種保守但有效的增強(qiáng)多肽溶解度的方法。
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