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歡迎來(lái)到肽谷生物-專業(yè)多肽定制。

服務(wù)熱線:+86-(0)-18115476705

原核表達(dá)系統(tǒng)

      原核表達(dá)系統(tǒng)是通過(guò)原核生物來(lái)獲得外源蛋白的體系,也是最常用的蛋白表達(dá)體系之一,相比哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng),其成本更低,操作也更簡(jiǎn)單。肽谷生物可以提供的原核表達(dá)系統(tǒng)服務(wù)包括:可溶性蛋白表達(dá)服務(wù)、內(nèi)毒素檢測(cè)服務(wù)等。

  • 可溶性蛋白表達(dá)服務(wù)

          肽谷生物可溶性蛋白表達(dá)采用大腸桿菌(E.coli)表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組蛋白生產(chǎn),您只需要提供目標(biāo)蛋白序列或其對(duì)應(yīng)的基因序列,肽谷生物會(huì)按照合同約定的量及純度進(jìn)行交付。

    服務(wù)流程與項(xiàng)目

    內(nèi)容

    周期

    1.基因合成

    密碼子優(yōu)化與基因合成

    1-2周

    2.載體構(gòu)建

    克隆至表達(dá)載體(質(zhì)粒)

    質(zhì)粒測(cè)序

             

    大量質(zhì)粒制備

    2-3周

    3.表達(dá)評(píng)估

    轉(zhuǎn)化適合菌株

    小量發(fā)酵培養(yǎng)

    SDS-PAGE檢測(cè)
    評(píng)估蛋白表達(dá)情況

    1-2周

    4.蛋白表達(dá)及純化

    根據(jù)表達(dá)評(píng)估進(jìn)行發(fā)酵

    蛋白純化

    SDS-PAGE檢測(cè),UV分析

    2-3周

    交付內(nèi)容:

    基因構(gòu)建測(cè)序報(bào)告;


    表達(dá)評(píng)估及可行性報(bào)告;


    純化蛋白;


    SDS-PAGE報(bào)告及實(shí)驗(yàn)報(bào)告。


  • 內(nèi)毒素檢測(cè)

          肽谷生物提供內(nèi)毒素檢測(cè)服務(wù)。內(nèi)毒素(endoroxin)是革蘭氏陰性細(xì)菌(如大腸桿菌E.coli)細(xì)胞壁中的一種成分,叫做脂多糖(LPS)。大腸桿菌在重組蛋白表達(dá)過(guò)程中,會(huì)產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素。內(nèi)毒素是一種熱源,會(huì)導(dǎo)致生物體炎癥發(fā)熱反應(yīng),所以使用重組蛋白于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí),內(nèi)毒素的檢測(cè)就很有必要。

    常用實(shí)驗(yàn)對(duì)內(nèi)毒素的要求如下表:

    重組蛋白應(yīng)用實(shí)驗(yàn)

    對(duì)內(nèi)毒素的要求

    體外酶活實(shí)驗(yàn)

    無(wú)影響

    蛋白抗原、制備抗原

    無(wú)影響

    體外細(xì)胞分化培養(yǎng)

    要求低內(nèi)毒素<1EU/ug

    其他動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

    要求低內(nèi)毒素

    內(nèi)毒素檢測(cè)方法:

        內(nèi)毒素的檢測(cè)方法有半定量的凝膠法檢測(cè)和絕對(duì)定量的顯色法。目前國(guó)際上最精確的是基于鱟試劑的顯色法和凝膠法。

    內(nèi)毒素的一般水平與藥用標(biāo)準(zhǔn):

    應(yīng)用領(lǐng)域

    內(nèi)毒素一般水平與標(biāo)準(zhǔn)

    大腸桿菌

    100萬(wàn) EU/ml

    自來(lái)水

    10-100 EU/ml

    生物制藥

    <0.01 EU/ml

    髓鞘內(nèi)注射藥

    0.2 EU/kg

    非髓鞘內(nèi)注射藥

    <5 EU/kg

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