抗體應(yīng)用簡介
ELISA的實(shí)驗(yàn)原理是基于抗體/抗原的特異性結(jié)合，它不僅能夠?qū)μ囟ǖ牡鞍走M(jìn)行定量分析，還可以研究分子之間的相互作用或其他特性。
將針對靶標(biāo)的抗體與檢測酶偶聯(lián)。在加入底物時(shí)，這種酶催化底物生成有色產(chǎn)物。通過分光光度計(jì)的測定，便可以知道樣品中抗原的濃度。
WB通常被用來確定樣品間蛋白的相對表達(dá)水平，還可以確定目標(biāo)蛋白的分子量大小，這有利于我們對蛋白的翻譯后修飾過程進(jìn)行研究。
根據(jù)分子量大小的不同，組織或細(xì)胞裂解液中的蛋白通過凝膠電泳得以分離。接著，分離的蛋白被轉(zhuǎn)移到膜上，隨后用抗體來檢測感興趣的蛋白。
IHC揭示了樣本內(nèi)抗原的組織特異性和亞細(xì)胞定位。相比與WB和ELISA，它的定量分析應(yīng)用較少，但是在完整組織中對于蛋白表達(dá)的分析更有優(yōu)勢 。
IHC染色是通過抗體識別靶蛋白實(shí)現(xiàn)的?？乖贵w復(fù)合物能夠通過酶促反應(yīng)或者熒光來實(shí)現(xiàn)可視化。這些底物可以直接偶聯(lián)到一抗或二抗上。
ICC通常使用熒光標(biāo)記的抗體來研究蛋白的亞細(xì)胞分布。與IHC相比，該技術(shù)提供了更高的空間分辨率，因?yàn)榕囵B(yǎng)的細(xì)胞不會有組織樣本的復(fù)雜環(huán)境。
在已經(jīng)固定并通透處理的細(xì)胞培養(yǎng)樣本中，抗體和靶蛋白特異性結(jié)合，再通過與一抗直接偶聯(lián)的熒光素或熒光二抗，使其可視化。用熒光顯微鏡即可對結(jié)果信號進(jìn)行觀察。多個(gè)靶標(biāo)可以使用不同熒光標(biāo)記的一抗同時(shí)進(jìn)行研究。
流式細(xì)胞術(shù)是測量細(xì)胞某些化學(xué)和物理特性的一種手段。參數(shù)測量包括細(xì)胞大小和細(xì)胞表面以及細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記物的表達(dá)量。
流式細(xì)胞儀測量被標(biāo)記抗體的熒光。細(xì)胞分選（FACS）是一種更復(fù)雜的系統(tǒng)，它能量化熒光信號，并將細(xì)胞以預(yù)先選定的特征（如熒光強(qiáng)度、大小和生存能力），從混合細(xì)胞群中分離出來。
免疫沉淀是分離純化單一或復(fù)合蛋白的最常用的一種方式。抗體被固定在固相基質(zhì)（如磁珠/瓊脂糖小球）上，從而從復(fù)雜溶液中捕獲抗原。
染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP) 技術(shù)用來確定特定蛋白是否與體內(nèi)特定DNA序列相互作用。
ELISPOT用于檢測如細(xì)胞因子和生長因子這樣的分泌蛋白。該技術(shù)可以量化和對比各種刺激下的免疫反應(yīng)。
在96孔板中，細(xì)胞生長在帶有抗體包被的PVDF膜或硝化纖維素膜上，分泌蛋白會與抗體結(jié)合?？贵w-抗原間的相互作用可以通過二抗進(jìn)行檢測，使得分泌蛋白的親本細(xì)胞呈現(xiàn)特定的顏色（一個(gè)點(diǎn)=1個(gè)細(xì)胞）。對膜進(jìn)行掃描和分析，以定量分泌蛋白的細(xì)胞的數(shù)量/百分比。
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